Sam Winchester (Jared Padalecki, "Gilmore Girls") deu o melhor de si para escapar da assustadora história de sua família. Ao contrário de seu irmão mais velho, Dean (Jensen Ackles, "Smallville", "Dark Angel"), Sam rejeitou a obsessiva busca do pai deles para descobrir as forças malignas que tomaram a vida da mãe dos garotos. Colocando a maior distância possível entre ele e sua família, Sam deixou sua casa logo após terminar a escola e foi para a universidade. Sua nova vida inclui uma bela e adorável namorada e planos para entrar na faculdade de direito. Dean, entretanto, tomou um caminho diferente, seguindo seu pai nos "negócios da família". Quando Dean aparece na porta de Sam com a notícia de que o pai deles desapareceu, Sam não tem outra escolha a não ser deixar seus planos pessoais de lado e se unir à Dean na estrada.

Após quatro anos separados, os irmãos novamente reunidos terão que se conhecer novamente, e suas rivalidades familiares continuam à flor da pele. Apesar da estranha infância que compartilharam, esses garotos acabaram tendo pontos de vista bem diferentes sobre o mundo. Dean ainda idolatra seu pai e, embora ele sempre aparente ser arrogante e destemido, na realidade ele é assombrado pelas memórias da violenta morte de sua mãe. Sam era muito novo para se lembrar da terrível em que a mãe deles morreu e nunca aceitou totalmente o assustador caminho que seu pai e irmão seguiram.

Uma misteriosa mensagem do pai deles leva os garotos de Winchester para uma cidade da Califórnia atormentada por uma série de inexplicáveis mortes. Eles logo ficam cara-a-cara com a lendária "Mulher de Branco" — o belo fantasma de uma mulher que assombra as estradas à noite, atraindo os homens jovens para a sua maldição. Embora eles não encontrem seu pai, Dean e Sam descobrem seu diário e tentam decifrar seus escritos em busca de pistas que irão ajudá-los a destruir esse espírito.

Assim que o trabalho é concluído, Sam tenta retornar à sua vida na faculdade, mas logo descobre que a malévola força que matou sua mãe agora fez o mesmo com sua namorada. Dominado pela raiva, tristeza e culpa, Sam logo compreende a obsessão de seu pai. Assim como Dean, Sam agora está totalmente comprometido em encontrar respostas e, no final das contas, se vingar.

Unidos pela tragédia e pelo perigoso e sanguinário trabalho sobrenatural, os irmãos viajam pelas estradas americanas, encontrando criaturas que a maioria das pessoas acreditavam existir apenas no folclore, superstição e pesadelos: o sanguinário Bloody Mary, a brutal besta nativa Wendigo, o homem com um ganho que assombra casais apaixonados e um mortal fantasma viajante que anuncia violentas quedas de avião.

Enquanto eles seguem as pistas do diário de seu pai, os irmãos percebem que ele passou todo o seu conhecimento acumulado durante os últimos 20 anos. O que eles não conseguem entender é por que ele desapareceu e os deixou continuar sem ele.

Assumindo a cruzada do pai deles, Sam e Dean atravessam as solitárias e misteriosas estradas dos EUA num Impala 67, procurando pelo seu pai desaparecido — e caçando cada criatura sobrenatural e maligna que eles encontram pelo caminho.